荧光显微镜常用的激发光源

荧光显微镜常用LED激发光源特点

相对于一般的显微镜，荧光显微镜保留着显微镜功能的同时，还能进行荧光观察，具有检出能力强，能进行多重着色观察的特点，广泛应用于生物医学领域。而荧光照明光源是荧光显微镜的关键部件，作用至关重要，既要考虑检测样本标记的荧光探针吸收光谱，同时又要考虑仪器的使用简便性。

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在LED前，荧光显微镜常用光源为高压汞灯，在LED激发光源普遍后，就成为荧光显微镜的主要光源。LED发射的单色光位于相对较窄的光谱带中，半高宽约为10nm-40nm，相对于高压汞灯，LED激发光源有几个重要优势：

1）额定使用寿命可达3000小时以上，远远超过其他光源；

2）整个额定使用寿命期间，其输出强度保持相对稳定，确保高效激发；

3）LED启动和关闭时间短，即开即用，不需要预热；

4）LED光效高，且亮度连续可调；

5）体积小、轻便，且为冷光源，弥补汞灯的大功率、发热、使用复杂灯问题，大大的降低了荧光显微镜使用成本并提高荧光显微镜操作的简便性。

对于荧光显微镜来说，尤其是单色激发的荧光显微镜，LED具有非常大的吸引力，例如B波段激发的荧光探针FLTC/GFP标记的样板，在蓝光LED激发下了可以获得非常好的图像，而广泛应用于免疫荧光检测领域。上海峰志多波段LED显微镜荧光激发光源，多波段LED光源可选，并可控制每一个LED的亮度，可以实现多波长的选择激发，便捷、高效。

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荧光显微镜分析中常用激发光源的种类

在荧光分析中常用汞灯作激发光源，根据汞蒸气压的不同可分为：

低压汞灯

汞蒸气，可发射出很强波长的射线，寿命很长，可长时间连续工作，射线对眼睛有害，不眼睛时不可长时间注视。

高压汞灯

高压汞灯又叫高强度紫外线灯，汞蒸气为1-数个大气压，可见炮区的谱线增强，在紫外光区，波长为365nm的光线zui强。

中压汞灯

可以发射一系列汞线组成的不连续光谱，除254nm波长以外，多数谱线都可作为校正波长使用。此外，还有超高压汞灯、汞-氙灯、汞-锌灯等。

氢洒和氘灯

是灯泡中加氢蒸气，经闭合放电产生160-350nm波长的光，氢朋激发态返回的基态时，就发射了氢的连续光谱，在160nm以下为线乐谱，氢灯和氘灯性能相同，其寿命也比氢灯长，因玻璃吸收紫外

线，故灯壳要用石英制作，或在灯泡出光处开一石英窗，此光源适用于紫外光区的测定。

氙灯

紫外线灯的光的辐射能强度很高，它可在220-1100nm之间发射很强的连续光谱，可用于紫外区，可见光及近红外区的测定，虽其辐射范围广，使用中在生产高热的同晨有臭氧味，其寿命短，灯泡内压较大，如日立牌650-60型荧光分光光度计，氙灯平时约有7个大气压，点燃后可达30个大气压，故使用进应注意。

1、按装紧固螺丝时用力应均匀，勿成扭力，以免灯泡破裂爆炸。

2、勿用手触及灯泡，以防受热不均破裂。

3、如紫外线灯泡有油污，应用鸡皮藮酒精轻擦，不能用布、棉花等物擦拭。

荧光显微镜激发荧光的方式有哪些

荧光显微镜是科研、病理、检验等部门常用的医用光学仪器之一。因为普通的显微镜是在明亮的背景上观察暗物，而荧光显微镜是在暗背景下观察彩色的图像，因此它比普通的显微镜分辨力提高100倍，可以观察到普通显微镜看不到的细节。但是它的调整，校正难度较高，只要解决了荧光显微镜的问题，其它显微镜问题就迎刃而解。

激发光源是荧光显微镜主要组成部分，荧光显微镜都采用200W的超高压汞灯作激发光源。它是由石英玻璃制作，中间呈球形，内充有一定量的汞，工作时在两极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约5～15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子在不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫光，足以激发各类荧光物质，因此被荧光显微镜普遍采用。

荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具。它是由超高压光源、滤片系统(包括激发和压制滤板)、光学系统和摄影系统等主要部件组成，是利用一定波长的光激发标本发射荧光。

荧光显微镜激发荧光的方式：
按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外线照明法)和BV激发法(使用蓝紫光)两种。

UV激发法是用短于400nm紫外光进行激发。该法不存在可见的激发光，所以被观察的荧光呈现该染料固有的荧光，容易判别标本上的特异荧光和背景组织的自身荧光。

BV激发法是以404nm、434nm为中心的由紫外至蓝光进行激发。该方法使用蓝光照射标本，所以荧光显微镜的截止滤光片必须使用可完全阻断蓝光并可充分通过所需绿、黄荧光的滤光片。用于荧光抗体法的荧光色素。对于激发光的极大吸收波长和荧光的极大发光波长比较接近，所以BV激发法使用的滤光片必须使用锐截止式滤光片。该法可用蓝光作为激发光，所以荧光色素的吸收效率较高，可得到较明亮的图像。其缺点是500nm以下的荧光无法看到，而500nm以上的使整个图像显黄色。在荧光抗体法中，大多以荧光色素特有的颜色来判断其特异性，所以在讨论微妙的特异性时，上述BV激发法的缺点往往影响极大。

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