很多同学觉得GFP和EGFP、avGFP都是绿色荧光蛋白,激发波长应该都一样,用便携式荧光蛋白激发光源的450nm波段去观察GFP的表达,但有时候无法看到gfp的荧光表达,不知道是设备原因还是没有表达成功。
大家在观察荧光蛋白表达之前,一定要看自己质粒图谱用的到底是哪种GFP,如果是GFP、wtGFP、avGFP必须用紫外光源去激发(365nm波段,LUYOR-3280UV),如果的eGFP、mEGFP那要蓝光波段(450nm LUYOR-3280RB)去激发。
下面是几种绿色荧光蛋白的激发波长和发射波长图谱:
GFP又名 wtGFP, avGFP, gfp10, 绿色荧光蛋白
GFP绿色荧光蛋白是一种基本的(构成荧光的)长斯托克斯位移荧光蛋白,发表于1992年,来源于Aequorea victoria。它对酸的敏感性低。GFP激发光的波长是395nm,mEGFP发射光的波长是509nm。
图一:wtGFP, avGFP荧光蛋白的激发光和发射光
EGFP又名增强型GFP,GFPmut1
EGFP绿色荧光蛋白是1996年发表的一种碱性(构成性荧光)绿色荧光蛋白,来源于Aequorea victoria。据报道,它是一种快速成熟的弱二聚体,具有中等酸敏感性。mEGFP激发光的波长是488nm,mEGFP发射光的波长是507nm
图二:eGFP荧光蛋白的激发光和发射光
mEGFP绿色荧光蛋白
mEGFP绿色荧光蛋白是2002年发表的一种碱性(构成性荧光)绿色荧光蛋白,来源于Aequorea victoria。它具有中等酸敏感性。mEGFP激发光的波长是488nm,mEGFP发射光的波长是507nm。
图三:mEGFP荧光蛋白的激发光和发射光
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图五:GFP在水稻种子上的表达
绿色荧光蛋白的激发和发射波长
荧光蛋白 | 激发光EX(nm) | 发射光EM(nm) |
TagGFP | 482nm | 505nm |
cgigGFP | 399 | 496 |
fabdGFP | 508 | 520 |
EGFP | 488 | 507 |
CGFP | 463 | 506 |
mmGFP | 398 | 505 |
muGFP | 490 | 508 |
oxGFP | 486 | 510 |
usGFP | 490 | 508 |
mEGFP | 488 | 507 |
eYGFP | 507 | 516 |
avGFP | 395 | 509 |
cEGFP | 489 | 507 |
EaGFP | 506 | 514 |
dfGFP | 505 | 524 |
ECGFP | 463 | 506 |
laGFP | 502 | 511 |
hmGFP | 490 | 510 |
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