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紫外交联仪的在northern实验的应用

作者:美国路阳 时间:2022-10-17 21:36:48浏览1174 次

信息摘要:

美国路阳UCL-3200/UCL-3500紫外交联仪在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龙膜、硝酸纤维素膜的交联、Sterilization(灭菌)、DNA Nicking(DNA缺失)的应用。

美国路阳UCL-3200/UCL-3500紫外交联仪在Northern blotting、Southern blotting、EMSA等尼龙膜、硝酸纤维素膜的交联、Sterilization(灭菌)、DNA Nicking(DNA缺失)的应用。

northern-blotting-diagram.jpg

1.Membrane Blotting

美国路阳仪器设备有限公司UCL-3500系列紫外交联仪可用于Northern、Southern blotting、EMSA等膜交联,当使用254 nm波长、能量为120.0mJ/cm2交联时,尼龙模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之间形成共价键稳定。

(1)将一张或两张用转移缓冲液(如10×SSC)轻轻润湿的吸水纸放在UCL-3500系列紫外交联仪的紫外辐照室。将尼龙膜放在吸水纸上,使附着核酸的一面朝上,使紫外线灯管能够直接照射核酸。

(2)关闭UCL-3500系列紫外交联仪的门。

(3)按下STAR(运行)按键启动,当紫外线灯管亮时,显示屏将立即开始从输入值开始累计。如果在曝光期间的任何点打开门,照射将停止,并显示已曝光值。(关上门按STAR按键继续照射。)

(4)辐照完成后,蜂鸣器将鸣响约3–4秒。自动交联大约需要25–50秒。

(5)取下尼龙膜并关上门,交联完成。每次使用后,清洁紫外线交仪紫外辐照室,以清除残留的盐。

3200-blacks.jpg

2.DNA Nicking

美国路阳仪器设备有限公司UCL-3200/UCL-3500紫外交联仪也可用于切割溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶中的DNA,代替HCl洗涤液,琼脂糖凝胶中比较大的DNA(>20kb)的转模效率很低,因此DNA在转移到尼龙膜之前需要进行前处理。DNA可通过HCl或紫外线照射进行切割。HCl脱嘌呤反应较难控制,且对温度极为敏感。所以在转移前,在短波长紫外光(254 nm)中80.0mJ/cm2切割DNA的方法更可靠。

3.Sterilization(灭菌)

紫外线shajun就是通过紫外线照射,破坏及改变微生物的DNA(脱氧核糖核酸)结构,使细菌当即死亡或不能繁殖,达到shajun的目的。真正具有shajun作用的是UVC紫外线,因为C波段紫外线很容易被生物体的DNA吸收,尤其是254nm波长左右紫外线佳。紫外线shajun属于纯物理方法,具有简单便捷、光谱高效、无二次污染。因此在短波长紫外光(254 nm)中灭菌95sec。

4.RecA Screening(RecA筛选)

UCL-3200/UCL-3500紫外交联仪也可用于筛选RecA突变体,在短波长紫外光(254 nm)中40.0mJ/cm2照射下,recA突变体阻止了紫外线诱导损伤的修复,阻止了紫外照射过的过的recA细胞的生长。

DNA短波紫外交联仪UCL-3200

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