绿色荧光蛋白在分子和细胞生物学中的应用越来越多。由于应用的多样性,已经开发出形成原始野生型绿色荧光蛋白(wtGFP)的几种变体。这些变体中的几个具有与wtGFP不同的激发和发射光谱。为了在定量这些GFP时获得zui大的灵敏度,重要的是使用zui合适的激光光源。在这里,我们表征了一些常用的GFP变体的激发和发射光谱,并建议使用LUYOR-3410和LUYOR-3415便携式荧光蛋白激发光源观察。
wtGFP蛋白zui常用的突变可分为三类:
(1)红移变体;
(2)像变体一样的野生型;
(3)发出蓝色光的变体。如图1所示,以EGFP为代表的红移变体具有一个集中在约488 nm处的单个激发峰,发射峰波长为509 nm。类似野生型的变体的主要激发峰位于395 nm,发射峰位于509 nm,而发出蓝色的突变体通常在380 nm附近有一个激发峰,在460 nm附近有一个发射峰(图1)。
表1. GFP变体的激发波长和发射波长数据
GFP的变体 | 激发波长EX (nm) | 发射波长EM (nm) | LUYOR-3415对应波段 |
wtGFP | 395 | 509 | UV |
GFPuV | 395 | 509 | UV |
Stemmer | 395 | 509 | UV |
EGFP | 488 | 509 | RB |
GFP-S65T | 489 | 509 | RB |
Y66H | 382 | 459 | UV |
EBFP | 380 | 460 | UV |
LUYOR-3415RG荧光蛋白激发光源照射植物根系,GFP在植物根系的表达
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