核酸分子杂交仪使用说明

进口医用全自动核酸分子杂交箱概念及原理

概念：核酸分子杂交是根据碱基互补原理，应用已知序列的分子探针检测待测单链核酸片段碱基序列的分子生物学技术，目前广泛应用于分子生物学生物化学病毒检测疾病诊断基因工程等学科领域中原理：核酸的Walson-Crick碱基互补配对原则（即A=T,GC）核酸分子杂交仪。上海峰志仪器有限公司现货供应美国UVP hb-1000分子杂交箱。

核酸分子杂交技术的分类
核酸分子杂交技术可按杂交环境分为固相杂交和液相杂交两大类
1固相杂交

固相杂交即先将待测单链核酸样品结合到支持物（常用有硝酸纤维素滤膜尼龙膜化学活化膜等）上，然后与溶液中的已知序列的标记探针进行杂交。固相杂交的特点：固相杂交后，未杂交的游离片段易除去，从而使膜上留下的杂交分子较易检测，并可有效避免靶DNA自我复性故固相杂交技术zui为常用。
常用的固相杂交类型有：菌落原位杂交斑点杂交狭缝杂交Southern印迹杂交Northern印迹杂交组织原位杂交和夹心杂交等。
2、液相杂交
液相杂交是指待测核酸和探针都存在于杂交液中，探针于待测核酸在液体环境中按照碱基互补配对形成杂交分子的过程液相杂交是研究zui早的杂交类型，但应用的普遍程度较固相杂交为低。

液相杂交的特点：无需支持物待测核酸分子不用固定在支持物上其弊端是由于杂交后过量的未杂交探针存在于溶液中，在已有杂交结合物检测水平条件下检测误差较高故液相杂交在过去较少应用近年来由于杂交检测技术的不断进步，商业检测试剂盒的开发等液相杂交技术得到了迅速发展。

常用的液相杂交类型有：吸附杂交发光液相杂交液相夹心杂交复性速率液相分子杂交。
原位分子杂交实际上是固相杂交中的一种形式，杂交过程中待测DNA处于未经抽提的染色体之上，并在原位置上被变性成单链，与探针进行分子杂交。
原位分子杂交与其他杂交技术主要区别在于待测碱基序列位于染色体上其主要特点是可以准确定位目的DNA在染色体上的位置因此在分子遗传学研究癌基因定位遗传性疾病临床诊断方面具有重要而广泛应用。

美国UVP HB-1000核酸分子杂交仪标准操作规程

1.目的
保证核酸分子杂交仪的正确和正常使用。
2.范围
美国进口HB-1000核酸分子杂交仪的使用
3.职责
实验室内部持有PCR上岗证的人员负责仪器的使用、维护。
4.工作流程
4.1 日常使用
4.1.1 本仪器适用温度为0-40℃，适用湿度为≤90%。
4.1.2 液晶显示界面
正常状态显示主界面，显示内容对应实时温度、转速、定时倒计时时间和提示状态等信息，当进入参数设定时，则显示参数设定界面。
4.1.3 面板界面及按键操作说明
a）“设定”键，按该键进入“设定参数”界面，再通过按“△”或“▽”键选择需要设定的“设定温度”“旋转速度”“定时时间”参数，当光标移动到对应参数后，再按“设定”键，则进入到对应的参数设定，在参数设定时间完成后，按“设定”键，则保存相应的设置。
b）“△”或“▽”键，用于调整参数设定项目或在参数设定时调节设定参数值的大小，每按一次上下移动一栏或数值增加较少1。
c）“◁”键，用于参数设定时调节参数设定的某一位，自右向左循环，每按一次移动一位。
d）“返回”键，参数都设定完毕后，按一下“返回”键，返回到主界面。
e）“消音”键，当有提示信号出现时，按“消音”键，声提示消失，提示指示灯仍然保持，同时液晶屏显示“消音”
f）“启动”键和“停止”键，通过操作“启动”、“停止”键，可控制转架的运行与停止，对应运行指示灯处于“亮”、“灭”状态。
g）“复位”键，如需要重新计时或重新开展一批杂交实验时，可按“复位”键，则电机停止转动，温度保持设定温度，定时时间恢复到初始设定状态。

 4.1.4 使用方法
a）使用前准备，打开箱门，取出转架，将离心管或杂交瓶插入转架中，应均衡放置。
b）将装好试样的转架安装到仪器上，观察转架是否固定到位。
c）检查无误后，关上箱门，打开电源开关，电源指示灯亮，设定工作温度、旋转速度、定时时间等参数。（仪器具有设定参数记忆功能，下次实验如参数相同时，可不需修改参数）
d）按一下“运行”按钮，运行指示灯亮，仪器即按照设定的参数运行，箱体内开始加温，转轴装置按设定的速度旋，定时时间开始以0.1min为步长倒计时，定时时间到时，仪器发出声音提示，并停止加热和转动。
e）实验过程中需停止转动时，可按一下“停止”键，则转架停止转动，箱体保持恒温，调整工作完成后，再按一下“运行”键，转架继续转动，定时器只有在电机正常旋转时工作。
f）实验结束，按一下“停止”键，打开箱门，取出样品。
g）如进行下一组样品的试验，按一下“复位”按钮，初始化定时时间，重复上述操作。

4.2 仪器保养
在核酸分子杂交仪的使用过程中，请严格按照本操作规程规定的运行环境和操作步骤使用，每次使用后需及时清理工作室，保持仪器外观整洁，但需避免使用强酸、碱等腐蚀性清洁剂及有机溶剂清洁。

4.3 仪器的校准
温度检测方法：用经过验定合格，测量范围为0-100℃的玻璃水银温度计。
4.3.1设定一个温度控制值（高于室内温度5-80℃），调节转速，运行仪器30min，直到显示的数值和设定的数值一致。
4.3.2透过门上的玻璃，观察温度计上显示的刻度，获得箱内的准确温度。
4.3.3比较这两个数值，如相差1℃以上，请于厂家联系。
4.4 故障分析与处理
4.4.1打开电源开关，仪器电源指示灯不亮，应首先检查仪器电源连接是否良好，如连接良好，请切断电源线，并用工具打开保险丝座，查看保险丝是否断路，如保险丝故障，请及时更换保险丝。
4.4.2在通电状态下，当本设备不能正常工作时，请先观察设定温度设定是否超过环境温度+5℃，如未超过请重新设置。
4.4.3如出现超温提示，先待箱体温度冷却至设定温度以下后，再重新观察，如果仍然出现， 则一般为设备故障。
4.4.4如排除上述问题，仪器仍不能正常工作，请及时与厂家联系维修。

美国UVP HB-1000核酸分子杂交仪操作注意事项 

分子杂交仪又称分子杂交炉、分子杂交箱，根据不同实验的需要可以选择不同的规格型号。它是现代实验室采用杂交技术的理想设备，可替代塑料杂交袋和水浴摇床，从而避免杂交袋破损带来的污染危险。杂交炉具有微机控温，炉内空气循环装置设计独特，升温速度快等特点。

分子杂交仪由箱体、杂交瓶转架或离心管转架、杂交管、摇床、隔膜、电脑控制系统等部件组成，如图所示。不同型号的箱体容纳的管子数、微孔版数、载玻片数和平板数也不同。
核酸分子杂交技术根据碱基互补配对原则，在一定条件下用标记的已知DNA或RNA片段（探针）来检测样本中是否有待测的核酸序列 [1] 。
生理条件下DNA呈稳定的双链螺旋结构，在体外，当有变性因素存在时(如温度超过65℃、含胺或极端pH时)，DNA分子内部的氢键断裂，解离成两条单链DNA，这种现象称为变性。在除去变性因素后，单链DNA能通过碱基互补再结合成稳定的双链螺旋结构，此过程称为复性或退火。

在复性过程中，若存有与样本核酸某部分序列相同或高度同源的外源性单链DNA片段或寡核苷酸(一般为17～45个碱基)时，两者可通过互补碱基形成杂交体，即双链DNA分子，这一过程称为杂交。用一段已知的DNA片段加入复性的DNA中，若能够结合成双链分子，说明样本中含有已知的DNA序列。

核酸分子杂交不仅发生在DNA与DNA之间，也可发生在RNA与RNA、RNA与DNA之间。生成的杂交体分别为 DNA-DNA、 RNA-RNA或 RNA-DNA的双链结构

注意事项:
1. 分子杂交仪需要安装在有良好接触的电源插座上。
2. 恒温室处于高温状态下装取杂交管时，注意不要烫伤。
3. 杂交管在装入反应液前一定要清洗干净，装入反应液及反应膜后一定要拧紧瓶盖，以免漏液。
4. 在进行同位素标记的杂交实验时，必须检查杂交管的密封情况，以免造成污染。一旦发生污染，请及时告知有关部门的使用人员和检修人员，尽可能的减少不必要的伤害。
5. 由于分子杂交仪设计结构紧凑，密封性要求高，所以在仪器运行中出现故障需要检修时，应切断电源由专业技术人员进行。