经常有同学咨询,看到文献里面很多荧光蛋白的照片非常漂亮,不知道怎么拍摄,上海峰志仪器有限公司的技术工程师将荧光蛋白表达的拍摄方法给大家说一下,供大家参考。
上图:红色荧光蛋白在愈伤上的表达
荧光蛋白表达的拍摄工具:
光源:光源用于激发荧光蛋白发出荧光,如果视野很大,建议购买LUYOR-3415系列GFP激发光源,这款照射面积大,激发荧光亮度高,拍摄效果非常好。
单反相机:常规的单反相机均可。
拍照滤镜:根据拍摄的荧光蛋白种类,要选择合适的荧光蛋白拍照滤镜,拍照滤镜是将激发光源的激发光过滤掉,让荧光蛋白的荧光通过,这样单反相机就能呈现精美的荧光照片。
暗室:因环境明亮光线,影响大荧光的拍摄,拍摄周围光线越暗,拍摄效果约好,如果没有暗室,可以选择夜晚拍摄。
荧光蛋白表达的拍摄技巧:
将单反相机档位拨到手动档位(M档),调整光圈、ISO、和快门速度三个参数到合适值。
将选择好的荧光蛋白拍照滤镜安装到单反相机镜头上。
将LUYOR-3415系列GFP激发光源安装到台式支架上,打开光源开关。
调整合适角度,相机对焦到拍摄目标上,拍摄即可。
说明:
如果是拍摄叶片上的GFP或eGFP的表达,叶片上的叶绿素在450nm激发光照射下会发出强烈的红色荧光,如果GFP或eGFP的表达量不高的话,会拍摄不到荧光蛋白的表达,这时候建议不用LUV-495A拍照滤镜,用LUV-520A绿色滤镜拍摄,LUV-520A绿色滤镜只允许绿色波段通过,叶绿素荧光被隔离掉了。