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GFP为什么在紫外线下会发光?

作者:上海峰志 时间:2021-04-11 15:43:55浏览9058 次

信息摘要:

野生型GFP(wtGFP)维多利亚,当aequorin与Ca2 +离子相互作用时发生GFP荧光,诱导蓝色光芒。其中一些发光能量被转移到GFP,将整体颜色向绿色移动。GFP在395nm处吸收蓝光,在475nm处具有较小的峰值,并在508nm处发射绿光,高强度紫外灯LUYOR-3410采用的是大功率紫外线led模组,25cm输出紫外线强度能够达到10mW/cm2,能够激发GFP发出明亮荧光,LUYOR-3410照射面积大,适用观察叶片、植株、小鼠等,LUYOR-3410紫外灯轻巧便携,无需预热,即开即用,目前,在中国农科院、华中农大、南京农大、南京林业大学、西南大学等科研院所得到了广泛应用。

GFP为什么在紫外线下会发光?

GFP又名 wtGFP, avGFP, gfp10, 绿色荧光蛋白

GFP绿色荧光蛋白是一种基本的(构成荧光的)长斯托克斯位移荧光蛋白,发表于1992年,来源于Aequorea victoria。它对酸的敏感性低。GFP激发光的波长是395nm,mEGFP发射光的波长是509nm。

GFP的激发光谱图

从上图的GFP的激发光谱图可以看出,紫外线是能够激发GFP发出绿色的荧光

下图为用LUYOR-3410高强度紫外线灯观察GFP的荧光表达效果:

高强度紫外线灯观察GFP的荧光表达

紫外线灯照射下观察烟草叶片上的GFP绿色荧光


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  1. GFP、avGFP、EGFP和mEGFP绿色荧光蛋白的区别 

  2. 高强度紫外线灯用于观察GFP的表达 

为什么大家都选择高强度紫外灯LUYOR-3410观察GFP?

高强度紫外灯LUYOR-3410采用的是大功率紫外线led模组,25cm输出紫外线强度能够达到10mW/cm2,能够激发GFP发出明亮荧光,LUYOR-3410照射面积大,适用观察叶片、植株、小鼠等,LUYOR-3410紫外灯轻巧便携,无需预热,即开即用,目前,在中国农科院、华中农大、南京农大、南京林业大学、西南大学等科研院所得到了广泛应用。

高强度紫外灯LUYOR-3410

纯化的GFP溶液在典型的室内灯光下看起来是黄色的,但是当在户外阳光下照射时,它们会发出明亮的绿色。蛋白质吸收来自阳光的紫外线,然后将其作为低能量的绿光发射。以下是人们在各种搜索引擎中提出的一些相关问题。

为什么GFP会发出荧光?

野生型GFP(wtGFP)维多利亚,当aequorin与Ca2 +离子相互作用时发生GFP荧光,诱导蓝色光芒。其中一些发光能量被转移到GFP,将整体颜色向绿色移动。

荧光蛋白如何发光?

该蛋白质含有238个氨基酸,其中三个(数字65至67)形成一个发出可见绿色荧光灯的结构。...在水母中,GFP与另一种称为aequorin的蛋白质相互作用,当与钙一起添加时会发出蓝光。

GFP

GFP 对光敏感吗?

GFP对酸敏感质子化状态,然而,在488nm处不吸收光。

GFP吸收什么波长?

GFP在395nm处吸收蓝光,在475nm处具有较小的峰值,并在508nm处发射绿光,量子产率为0.72-0.85(12,13)。

为什么来自水母的发光基因在转基因小鼠中起作用?

这些老鼠之所以发光,是因为科学家将某些生物发光水母中发现的基因插入到它们的DNA中。该基因是一种蛋白质的配方,当被蓝色或紫外线击中时会发出绿色。...结果,他们的皮肤,眼睛和器官发出诡异的光芒。

荧光标记物如何工作?

荧光标记物具有在其生物环境中研究蛋白质的能力。当一定波长的光被引导到分子的发色团时,光子被吸收并将电子激发到更高的能量状态。...多种荧光标记可用于染色细胞的不同部分。

为什么荧光蛋白很重要?

光激活荧光蛋白能够在空间和时间上跟踪光标记的分子和细胞,也可用于超分辨率成像。基因编码的传感器可以监测酶的活性和各种分析物的浓度。

荧光是如何工作的?

荧光,发射电磁辐射,通常是可见光,由材料中原子的激发引起,然后几乎立即重新发射(在大约10-8秒内)。初始激发通常是由入射辐射或粒子(如X射线或电子)的能量吸收引起的。

为什么GFP如此稳定?

GFP是238个氨基酸的单链多肽(12)。这些氨基酸中的大多数形成ß片,通过反平行结构压实形成桶。...紧凑的结构使GFP在各种条件下都非常稳定,包括用蛋白酶处理(1)。

什么是 GFP 表达?

绿色荧光蛋白(GFP)已被用作基因表达的报告分子,因为它在蓝光激发后发出绿色荧光。...48小时后,从上清液中收获载体颗粒并施加到靶细胞上,然后对其进行基因表达分析。

GFP 标记是如何完成的?

GFP标记是一种通过使用GFP作为荧光蛋白报告器来制备用于荧光显微镜的样品的方法。这是通过将GFP与靶蛋白在氨基酸链的N或C末端克隆来完成的。

GFP是否被紫外光激发?

野生型GFP有两个激发峰:一个主要在395nm处,一个次要在475nm处。如果 GFP 在 395nm (紫外光)处被激发,它将在为508nm 处发射绿光。475nm处的激励值为503nm。S65T突变导致发色团电离。

GFP在固定后会发出荧光吗?

作者能够检测荧光,然后使用10nm金标记的二抗通过电子显微镜观察切片。在这种情况下,GFP荧光在4%多聚甲醛和0.1%戊二醛中存活下来,并且可以通过荧光显微镜直接可视化。

绿色荧光蛋白吸收了什么波长的光,发射了什么波长的光?

来自维多利亚水母的绿色荧光蛋白(GFP)在用长波长紫外线(UV)或蓝光(zui大400nm,475nm处有次级峰)激发时发出绿光(λmax = 509 nm)[1]。

RFP 在紫外线下会发光吗?

绿色荧光蛋白。...纯化的GFP溶液在典型的室内灯光下看起来是黄色的,但是当在户外阳光下服用时,它们会发出明亮的绿色。蛋白质吸收来自阳光的紫外线,然后将其作为低能量的绿光发射。

为什么荧光对水母很重要?

该蛋白质在北美水母Aequorea victoria中自然表达,并通过吸收环境中蓝光的能量并相应地发出绿色光芒来起作用。科学家们不知道为什么这些水母进化出它们的光芒,但有一种假设是,它可以帮助它们抵御捕食者。

GFP基因会发光吗?

绿色荧光蛋白(GFP)是由维多利亚水母产生的一种蛋白质,在可见光谱的绿色区域发出生物发光。...秀丽隐杆线虫,并开创了一个GFP将被用作细胞生物学发光标志物的时代。

为什么维多利亚Aequorea会发光?

维多利亚水母的生物发光是由于绿色荧光蛋白(GFP)和称为aequorin的化学发光蛋白的存在。...这种蛋白质在与钙结合时会发光,而不需要照明来激发。

转基因水果的主要用途是什么?

传统的作物改良方法往往收效有限,因为倍体水平不同,遗传变异性有限,生育率低。因此,遗传转化为商业品种的改良提供了巨大的潜力。

水晶水母如何发光?

有时,水晶果冻会在铃铛的边缘周围发出绿色的光芒。这是由一种称为aequorin的光蛋白引起的,它发出蓝光(称为生物发光),以及一种称为绿色荧光蛋白(GFP)的辅助蛋白,它发出绿光。

荧光标记物在黑暗中会发光吗?

荧光标记,例如我们的荧光醇基涂料标记和荧光水性涂料标记,因为它们能够反射紫外线或紫外线,因此在黑暗中会发光。专门发射紫外线的灯(也称为黑光)不发出人眼可见的光。

为什么荧光灯会发光?

您看到的额外光芒称为紫外线(UV)光。荧光颜色是紫外线反应性的,并将光转换为主波长或颜色。...磷光颜料将光源储存为能量,并在灯关闭后继续发出光芒。

什么是荧光标志物?

荧光标记物是特定的分子,如蛋白质,它们是共价结合的荧光团,选择性地结合到靶标的功能团上进行检测。zui常用的荧光分子是抗体。

蛋白质荧光是如何工作的?

当样品吸收特定波长的光并发射不同波长的光时,就会发生荧光。在大多数情况下,例如蛋白质,发射的光波长比吸收的光长。

黄色荧光蛋白有什么作用?

它们降低了氯化物的敏感性,更快的成熟和更高的亮度(定义为消光系数和量子产率的乘积)。通常,YFP作为遗传编码的FRET传感器的受体,其中zui有可能的供体FP是单体青色荧光蛋白(mCFP)。

什么是紫外荧光?

荧光是一些宝石暴露在看不见的紫外线 (UV) 下时发出的可见光。在天然钻石中,蓝色是zui常见的荧光颜色,但其他颜色可能可见。

紫外线下有什么荧光?

荧光矿物和宝石 在黑光下发光 荧光岩石包括萤石、方解石、石膏、红宝石、滑石、蛋白石、玛瑙、石英和琥珀。矿物和宝石由于杂质的存在而zui常被制成荧光或磷光。

GFP在什么温度下变性?

当GFP在高于70°C,5,6 pH极端温度或氯化胍的温度下变性时会失去荧光。它只有在变性时才会部分恢复其荧光。评价了分离和提取的重组GFP的热稳定性。

BFP与GFP有何不同?

与pH 8.5和7.5下对SDS诱导的变性非常耐受的GFP不同,BFP在pH 8.5时容易失去约20%的荧光,在pH 7.5时容易失去约60%的荧光。

GFP的稳定性如何?

接触10分钟后,GFP在磷酸盐缓冲溶液(pH 7)中表现出zui大的稳定性,有效氯的范围为20-100 ppm,相当于氯化WFI溶液中的40-70 ppm范围(pH 11(0.23),磷酸盐缓冲液中的10-50 ppm范围(pH 6.86(0.21)。

GFP记者如何运作?

绿色荧光蛋白(GFP)使表达它的细胞在紫外线下发出绿色。需要专门的显微镜来观察单个细胞。黄色和红色版本也可用,允许同时研究多个基因。它通常用于测量基因表达。

如何检测 GFP 表达?

GFP表达可以通过荧光显微镜、荧光活化细胞分选(FACS)分析或转染后24-72小时荧光计测定来检测,具体取决于所使用的宿主细胞系。有一份已发表的哺乳动物细胞系表达GFP的稳定报告(48)。

为什么GFP在基因工程工作中很重要?

编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因zui近已成为真核生物中基因表达的重要视觉标记,因为它比其他报告基因更敏感,不需要特殊的辅助因子进行检测(7),并且可以用光谱荧光计进行定量(24)。

什么是GFP质粒?

pGLO质粒是一种工程质粒,用于生物技术,作为制造转基因生物的载体。质粒包含几个报告基因,zui着名的是绿色荧光蛋白(GFP)和氨苄西林抗性基因。GFP是从水母鱼Aequorea victoria中分离出来的。

如何测量GFP荧光?

流式细胞术和荧光显微镜是检测GFP信号的两种常规工具;流式细胞术是一种有效且灵敏的技术,用于定量分析荧光强度,而荧光显微镜可以可视化GFP的亚细胞位置和表达。

GFP和EGFP有什么区别?

GFP和EGFP之间的主要区别在于,GFP是一种掺入非哺乳动物细胞分子克隆中的野生型蛋白质,而EGFP是一种改进或工程化的GFP类型,可用于哺乳动物细胞。

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